转染试剂的制备和储存建议
转染试剂制备(1 mg / mL)
用料:
1.1g PEI MAX 40K(kingmorn目录号KE1098)
2.1升Milli-Q®水,注射用水(WFI)或相当的生物级水
3.1N氢氧化钠
4.无菌25 mL塑料移液器
5.0.1µm,0.2µm或0.22µm PES真空无菌过滤器
6.无菌HDPE或聚丙烯储存瓶
设备:
1.1L玻璃烧杯
2.PTFE涂层搅拌棒
3.磁力搅拌板
4.1L玻璃量筒
5.pH计
6.皮管控制器
7,带管的真空泵
方法:
1.在1升玻璃烧杯中,将1克PEI MAX 40K悬浮在900毫升水中。
2.将涂有PTFE的搅拌棒添加到1L玻璃烧杯中,并设置搅拌以产生小涡旋。
3.等待PEI MAX 40K完全溶解。通常只需要不到5分钟的时间。
4.使用25 mL塑料移液器向1L玻璃烧杯中滴加1N氢氧化钠,直至pH为6.90至7.10。
5.如果pH意外超过7.10,请使用1N盐酸和新的25 mL塑料移液管将pH降低至6.90至7.10。
6.从1L玻璃烧杯到1L量筒的倾析溶液。
7.在1L量筒中加水以将最终体积调整为1L。
8.通过真空膜的无菌过滤溶液。
9.根据需要分装溶液。
10.将等分试样储存在4°C
转染溶液的储存和保质期:
在4°C的合适容器中,转染溶液将保持其最佳性能至少六个月。对于定性工作,该方案可能适用长达一年。